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    索氏抽提法測定大豆粉中脂肪含量方法改進-上海纖檢

    [導讀]本文對GB/T 5009.6—2003《食品中脂肪的測定》索氏抽提法的實驗技術進行試驗和研究,提出了 改進技術措施,并運用這些方法,在CNAL能力驗證考核中對 CNAL T0186大豆粉樣品進行測定,提高了測定準確 度和重復性

    索氏抽提法適用范圍較廣,可用于肉制品、豆制 品、谷物、堅果、油炸果品、中西式糕點等樣品中粗脂 肪含量的測定。我們采用此法,在2005年3月參加了由 國家實驗室認可委員會(CNAL)組織的能力驗證考 核,按《CNAL T0186大豆中營養成分檢測能力驗證方 案》的要求(以下簡稱《驗證方案》),對國家標準物 質研究中心發放的考核樣品進行分析測定工作。經仔細 試驗和研究索氏抽提法的全過程,針對有可能影響最終 檢測結果準確度和重復性的問題,我們采取一些改進技 術措施,完善實驗操作,取得較好的效果。

    1 索氏抽提法分析中存在的不明確之處

    因《驗證方案》對考核樣品的測定結果準確度有很 高要求,我們進行了慎重的預實驗。在實驗過程中發 現,索氏抽提法中有多處列出的分析步驟,沒有規定具 體操作方式或相關參數,甚至有不妥之處(下文在括弧 內注明存在的問題),實際操作中難于把握具體細節, 有一定的隨意性,對檢測結果有較大影響。 1.1 試樣處理 準確稱取樣品2.00~5.00g,必要時(未注明何種情 況為必要)拌以海砂,全部移入濾紙筒內(未注明制作 濾紙筒的具體要求和尺寸,應該多大為適用)。 1.2 抽提取 將濾紙筒放入脂肪抽提器的抽提筒內,連接已干燥 至恒重的接收瓶,由抽取器冷凝管上端加入(此操作法 不妥)無水乙醚或石油醚至瓶內容積的2/3處,于水浴

    上加熱(導熱方式不妥及未注明加熱溫度),使乙醚或 石油醚不斷回流提取,回流速度為6~8次/h,一般需抽 提6h~12h。 1.3 稱量測定 取下接收瓶,回收乙醚或石油醚,待接收瓶內乙醚 剩1~2ml時在水浴上蒸干(仍為導熱方式不妥及未注明 加熱溫度),再于100±5℃干燥2h。放置于干燥器內冷 卻0.5h后稱量。重復以上操作直至恒重。

    2 實驗技術研究及改進

    2.1 加入海砂的量與方法 加入海砂的目的是使樣品保持膨松狀,在抽提時不 結塊,使乙醚能夠順暢進入樣品內部與其充分接觸,提 高回流抽提量,并易于進行下一步往濾紙筒轉移的操 作,適用對象為粉末狀樣品。本次大豆粉考核樣研磨得 較細,必須加入適量海砂混勻,保證轉移和抽提完全, 否則會出現測定結果偏低的可能性。經試驗加入量以與 樣品體積比例1:1為宜,可使大豆粉樣品疏松通透,操 作要點為加入時應充分攪拌均勻。

     2.2 濾紙筒的制作 濾紙筒制作尺寸主要考慮以下幾個因素:(1)濾 紙不宜過小。折疊成筒狀時重疊部分較少,抽提時樣品 容易從接頭處漏失。(2)濾紙不宜過大。折疊成濾紙 筒時會使重疊部分過多過厚,阻礙抽提液順暢流經樣 品,降低抽提效率。(3)特別要注意與實驗器皿尺寸 相匹配。濾紙筒的直徑應與抽提瓶內徑一致,偏大則不易將濾紙筒放入抽提瓶,硬性推入可能造成濾紙筒破裂。 偏小則會使濾紙筒漂浮于抽提液中,隨抽提液升降,濾紙 筒浮于液面之上的部分,抽提效果將受影響。因此,我們 選擇Φ18cm定量濾紙制作濾紙筒,將下端向上折疊2cm。 既保證抽濾時速度適中樣品不損失,又使濾紙折疊成筒狀 時有足夠適宜的重疊部分,不會使樣品從接縫處漏出或者 阻礙抽提液滲透流通。操作時必須注意:樣品在倒入時不 得進入重疊部分的外層。濾紙筒放入抽提瓶底,用潔凈玻 璃棒或吸管將濾紙筒上端輕輕壓下成封閉狀,但要注意不 要壓得太緊,高度與回流管(細管下沿)齊平。 

    2.3 抽提劑乙醚的加入方法 本次實驗采用無水乙醚為抽提劑,加入無水乙醚 時,不能按1.2的方法直接從冷凝器上端加入。這樣操作 加入的乙醚向下流淌速度太快,將順冷凝管直接沖滴到 濾紙筒上,會使樣品從濾紙筒中滲出,抽提瓶中出現混 濁。我們對此作了改進,具體的做法是將乙醚直接倒入 接收瓶內至2/3處,避免了抽提劑直接沖擊包有樣品的 濾紙筒,從而減少樣品損失。 

    2.4 水浴加熱的導熱方式及加熱溫度 我們通過對實驗全過程的觀察分析,認為采用常規 的水浴加熱方式是不妥當的。原因為:該方法的最終測定 手段是對接收瓶恒重,稱量其增重(即樣品重量),精確 至萬分之一克。因此除樣品本身外,其它能使接收瓶改變 重量的因素均應排除。而將接收瓶直接浸入恒溫熱水中, 難于避免水中雜質結附于瓶底(如水垢等),特別是類似 本次實驗這樣加熱時間長的情況就更加嚴重。因此,我們 采用降低水浴鍋中的水位,將接收瓶架于水浴鍋墊圈上的 辦法,改為以蒸氣為熱媒介質進行加熱,確保接收瓶底不 接觸加熱水。為滿足乙醚不斷回流抽提(6~8次/h)的要 求,經多次試驗,水浴溫度控制在75~80℃為宜。 

    2.5 其它注意事項 (1)對于檢測質量要求高的樣品,正式開始測定前 應做好預實驗,初步了解樣品中脂肪含量的范圍,估算適 合的取樣量,取樣量不宜太少,否則測定精密度較差。 (2)接收瓶中最終結果呈現的應該是澄清透明的油 狀物,若是出現混濁狀或有少量沉淀物,都表明樣品有滲 漏現象。如果發生這種情況,必須重新進行樣品的檢測。 (3)回流時間以有冷凝后的乙醚滴下開始記時, 全程共7.0h。 (4)恒重接收瓶、樣品時,控制干燥箱的溫度為 100±3℃,2h,在干燥器中冷卻0.5h后稱重。特別強調 每次稱量的時間間隔要控制準確一致。(5)注意天平室的溫度、濕度在各次稱量時應基 本保持一致,便于稱量達到恒重結果。 (6)在整個實驗操作過程中,應配戴一次性PVC 手套,避免手對接收瓶外壁的沾污,造成結果偏重,形 成正誤差。 (7)有條件時應帶質控樣同時分析,檢驗實驗的 系統誤差,保證測定準確度。

    3 考核樣檢測結果

    按《驗證方案》對考核樣品的測定要求,采用以上 改進完善后的方法,測定CNAL T0186大豆考核樣中脂 肪含量,測定5個平行樣取平均值。數據準確度高(︱Z︳ ≤ 2 ),精密度好(A樣:RSD=3.64%;B樣:RSD= 0.78%),獲得了滿意的結果。實驗測定結果見表1

    檢測完成后,及時整理了實驗數據,按時將全部資 料上報。根據國家實驗室認可委員會(CNAL)反饋的 考核評審結論,本次對考核樣檢測的數據準確可靠,取 得滿意結果(見表2)。

    4 結論

    采用前述經改進的實驗技術,可以很好地完善索氏 抽提法,使實驗過程更為科學合理,從而獲得高質量的 檢測結果。






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